抗弓形虫主要表面抗原1单链抗体的筛选及鉴定

• 作者: 司进 曹利民 朱荫昌 梁幼生 王晓婷 管晓虹
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 主要表面抗原1 单链抗体 靶向
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 202-206
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 3988字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2005.03.010

摘要

目的采用重组抗原从人源化单链抗体库(Human single fold scFv library)中筛选和鉴定抗弓形虫主要表面抗原1(rSAG1)的单链抗体,对其特异性的弓形虫靶向作用进行分析,为弓形虫靶向生物治疗提供靶向分子.方法以重组SAG1融合蛋白作为包被抗原对噬菌体抗体库进行3轮固相筛选,获得抗rSAG1融合蛋白的阳性克隆;用纯化的原核表达载体pET-32C的亲和标签(Trx-His-Stag)、鼠可溶性抗原和大肠杆菌抗原对上述阳性克隆进行差异筛选,获得能特异性结合rSAG1的噬菌体克隆;差异筛选获得的特异性阳性克隆转染大肠杆菌HB2151进行诱导表达和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,获得能分泌抗rSAG1单链抗体(anti-rSAG1 scFv)的阳性噬菌体克隆;DNA测序分析抗rSAG1的单链抗体基因序列.用Ni2+螯合柱亲和纯化rSAG1单链抗体,并用免疫印迹技术(Western blot)对纯化的抗rSAG1单链抗体进行免疫反应性检测;免疫组化检测rSAG1单链抗体对弓形虫速殖子的靶向作用.结果经过rSAG1抗原的固相筛选后获得24株阳性克隆,差异筛选后获得5株能特异性结合rSAG1的噬菌体克隆,其中有3株分泌性表达抗rSAG1的单链抗体,DNA测序和Genbank比对表明其为3株不同的抗弓形虫主要表面抗原1的单链抗体;West-ern blot表明亲和纯化的单链抗体能较好结合rSAG1;免疫组化显示抗rSAG1单链抗体可与弓形虫速殖子结合.结论利用噬菌体抗体库技术获得的特异性人源rSAG1单链抗体与弓形虫速殖子有较强的结合能力,这对弓形虫的靶向生物治疗具有潜在应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁幼生	江苏省寄生虫病防治研究所、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫病学重点学科	9	36	3.0	5.0
2	司进	南京医科大学分子生物学研究所	12	37	4.0	5.0
4	朱荫昌	江苏省寄生虫病防治研究所、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫病学重点学科	7	11	2.0	2.0
5	曹利民	华中科技大学同济医学院免疫学系	10	27	3.0	4.0
8	王晓婷	江苏省寄生虫病防治研究所、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫病学重点学科	3	11	2.0	3.0