MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备

• 作者: 张文敏 张萌 文剑明 肖刚 谢丹 郭爱林
• 来源期刊: 中山大学学报(医学科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 黑色素瘤抗原-3 原核表达 重组蛋白 纯化 抗体
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 176-179
• 页数: 4页
• 分类号: R735.2
• 字数: 3269字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.02.014

摘要

[目的]构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体.[方法]利用RTPCR方法扩增MAGE-3基因片段,连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEXMAGEE-3并测序.将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化.用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性.[结果]构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达一相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3.制备了兔抗GST-MAGE-3抗体.Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合.[结论]获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体、为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文剑明	中山大学中山医学院病理学教研室	48	252	9.0	12.0
2	张文敏	中山大学中山医学院病理学教研室	5	47	4.0	5.0
3	肖刚	中山大学中山医学院病理学教研室	38	158	6.0	9.0
4	张萌	中山大学中山医学院病理学教研室	79	306	9.0	12.0
5	谢丹	中山大学中山医学院病理学教研室	33	188	7.0	11.0
6	郭爱林	中山大学中山医学院病理学教研室	7	60	5.0	7.0