表达人内啡肽的腺病毒/腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析

• 作者: 俞卫锋 吴飞翔 姜梨华 崔贞福 徐学武 李泉 王星华 董刚
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: β-内啡肽 腺病毒 腺相关病毒 杂合病毒 构建 表达
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传学和分子生物学
• 页码范围: 856-859
• 页数: 4页
• 分类号: Q93|Q78
• 字数: 3867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.06.008

摘要

应用分子生物学方法将人β-内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312-AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒/腺相关杂合病毒Ad/AAV-EE.用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度.杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达,ELISA法测定培养液中表达产物浓度.PCR法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1.29×1010PFU/mL.结果表明转基因从第1天到第14天的表达水平呈上升趋势,第14天达到3141pg/mL.