大鼠骨桥蛋白重组腺病毒的构建及体外表达

• 作者: 刘安娜 王佐林
• 来源期刊: 口腔颌面外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨桥蛋白 腺病毒载体 质粒重组 基因克隆
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 233-237
• 分类号: R782.2|Q78
• 字数: 3175字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4979.2012.04.002

摘要

目的:构建表达大鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的重组腺病毒载体,并观察其感染人胚肾293AD(human embryo kidney 293AD,HEK293AD)细胞后OPN的表达.方法:提取大鼠骨组织总RNA,利用反转录聚合酶链式反应(reversal transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增目的片段,将产物双酶切后连入腺病毒穿棱质粒载体中,构建pacAd5 CMV-IRES-GFP-OPN.PCR及双酶切鉴定正确后,与腺病毒骨架载体pacAd5 9.2-100同时经Pacl酶切,利用HEK293AD细胞进行包装、生产,构建出重组腺病毒.通过HEK293AD细胞绿色荧光表达反映重组腺病毒的表达情况,并用RT-PCR检测OPN的表达.结果:成功构建了携带OPN的重组质粒,脂质体介导下转染HEK293AD细胞,7d后可见明显的荧光表达,12d后有半数细胞飘起,收集原病毒液感染的293AD 细胞后,实验组OPN的表达明显高于对照组细胞,24h感染效率为15％,36 h感染效率为21％.结论:利用腺病毒载体系统RAPAD成功构建了含OPN基因的重组腺病毒载体,为进一步研究OPN对皮肤创口愈合的影响提供了一定的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王佐林	同济大学口腔医院口腔颌面外科	51	295	11.0	14.0
2	刘安娜	同济大学口腔医院口腔颌面外科	1	0	0.0	0.0