重组腺病毒介导MRP反义RNA对人肝癌耐药细胞株MDR表型逆转的实验研究

• 作者: 严律南 李德华 胡海洋 苟兴华 赵兰英 陈琳 韩蕾
• 来源期刊: 实用肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 RNA,反义 抗药性,多药/遗传学 腺病毒科/遗传学 肿瘤细胞,培养的 重组,遗传 药物耐受性 P-糖蛋白/遗传学
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础与临床研究
• 页码范围: 484-489
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 字数: 5720字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1692.2005.06.006

摘要

目的探讨重组腺病毒载体介导的多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA对多柔比星(阿霉素)诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM多药耐药表型的逆转作用.方法将MRP基因5′端转录起始位点附近长约500 bp的基因片段反向克隆到腺病毒AdEasy系统的穿梭质粒AdTrack-CMV上,通过在细菌内同源重组、并在293细胞中包装、扩增,构建出携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy-GFP-Asmrp(简称Ad-Asmrp),测定其滴度及对肝癌细胞SMMC-7721/ADM的转染效率;在体外用MOI为100的该重组腺病毒转染肝癌细胞SMMC-7721/ADM,测定转染后细胞对阿霉素(ADM)及柔红霉素(DNR)的半数致死量(IC50)并计算耐药倍数(RF值);在转染后不同时间点(24、48、72、96、120小时)用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P190表达、并用RT-PCR反映细胞MRP之mRNA水平的变化(以β actin mRNA水平为内对照).结果重组腺病毒Ad-ASmrp滴度可达2.5×109efu/ml,MOI为100时,即可致90%以上的肝癌细胞SMMC-7721/ADM被感染.体外实验中,该重组腺病毒(MOI=100)转染后的人肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM对ADM、DNR的IC50分别为0.487 μg/ml、0.328 μg/ml,RF分别为97.4倍、109.3倍,RF分别下降36.8倍和35.4倍.在转染后24小时,MRP之mRNA水平开始下降并呈持续下降趋势(P＜0.05),48小时后伴有P190蛋白表达的持续下降(P＜0.05),二者趋势一致.转染后48小时,经流式细胞仪测得细胞内DNR浓度出现上升趋势(P＜0.05),此后持续明显上升(P＜0.05).结论重组腺病毒介导的MRP反义RNA可有效封闭MRP基因表达,降低P190蛋白水平,在体外实验中能增加人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM对化疗药物的敏感性,对肝癌耐药细胞的MDR表型有较好的逆转作用,并为肝癌MDR机制及其逆转方式的研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严律南	四川大学华西医院普外科	326	1652	17.0	25.0
2	陈琳	南京医科大学第一附属医院普外科	45	188	8.0	11.0
3	李德华	成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室	24	117	6.0	8.0
4	苟兴华	成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室	23	119	6.0	8.0
5	韩蕾	成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室	22	112	6.0	8.0
6	赵兰英	成都地奥制药集团有限公司基因工程药物研究室	15	65	5.0	6.0