抗菌肽Cecropin B-肿瘤血管生长抑制因子 Kringle5融合蛋白表达载体的构建及其表达

• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽Cecropin B 肿瘤血管生长抑制因子Kringle5 重叠区扩增法 融合表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 281-284,290
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3135字
• 语种: 中文

摘要

通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体.重组载体转化BL21(DE3)细胞后,提取质粒进行PCR鉴定和序列分析,证明重组质粒pET32a/CB-K5阅读框架和融合基因序列均与预期相符.实验结果显示,成功地构建了抗菌肽CecropinB(CB)和肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)融合蛋白的表达载体pET32a/CB-K5.转化E.coli BL21(DE3),SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,融合蛋白以包涵体的形式在重组转化菌株中获得高效表达,表达量达到菌体总蛋白的50%.