马β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

• 作者: 刘光亮 吴东来 孟庆文 徐树兰 王群 童铁钢 肖一红
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 马β2-微球蛋白 基因 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 851-855
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.11.002

摘要

为了构建马MHCⅠ四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的β2m基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a(+)进行连接,转化入感受态细胞BL21(DE3).将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化.结果表明,去除信号肽部分的马β2m基因全长300 bp,含有1个开放阅读框,编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白;表达产物以包涵体的形式存在,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,重组蛋白的分子质量约为15 ku,且具有免疫生物学活性.