猪β干扰素成熟蛋白编码基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达与纯化

• 作者: 吴阳 李晨阳 李玉林 李玲玲 王岁楼
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪β干扰素成熟蛋白 基因克隆 原核表达 亲和纯化
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 75-78
• 页数: 4页
• 分类号: S852.4|Q785
• 字数: 3133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2006.12.018

摘要

从猪肝脏中提取基因组DNA,利用PCR法直接扩增了猪β干扰素成熟蛋白编码基因.将PCR产物亚克隆至pGEM-7Zf(+)载体,转化入大肠埃希菌TG1,筛选出阳性菌株后进行测序.序列分析结果表明,克隆片段含编码猪β干扰素成熟蛋白质的495个核苷酸,与GenBank上(登录号:S41178)的序列同源性达到100%.在此基础上,构建了猪β干扰素原核表达载体pQE30/poIFN-β并转化入大肠埃希菌M15.该工程菌在37 ℃经0.03 mmol/L IPTG诱导4 h后,进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约20 ku的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在.经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的18%.包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪β干扰素进行复性及活性研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王岁楼	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	56	611	15.0	21.0
2	李玉林		35	123	7.0	9.0
3	李晨阳	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	6	50	5.0	6.0
5	李玲玲	河南师范大学生命科学学院	4	26	3.0	4.0
9	吴阳	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	3	17	3.0	3.0