线粒体细胞色素C氧化酶RNAi慢病毒载体的构建

• 作者: 吴秋良 夏云飞 江高峰 邵建永 陈忠平 陈艳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 线粒体 重组 慢病毒属 载体 细胞色素C氧化酶
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1117-1123
• 页数: 7页
• 分类号: R730.54|Q785
• 字数: 4521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2005.06.017

摘要

目的:通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础. 方法: 根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,插入到pENTR/U6质粒缺口末端,连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体;通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest 载体上,构建含U6启动子、靶序列和Pol Ⅲ终止子表达框的MTCOX-I shRNA表达重组体;经脂质体导入293FT细胞,包装成慢病毒,收集病毒上清并检测其滴度.Western blotting检测干扰后细胞内线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达. 结果: 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功;成功包装成高滴度的慢病毒.Western blotting检测结果证实构建的MTCOX-I shRNA表达重组体可显著抑制线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达. 结论: 成功构建了携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈忠平	中山大学肿瘤防治中心实验研究部	80	412	12.0	18.0
2	夏云飞	中山大学肿瘤防治中心实验研究部	61	339	10.0	14.0
3	吴秋良	中山大学肿瘤防治中心病理科	78	491	10.0	17.0
4	邵建永	中山大学肿瘤防治中心病理科	23	298	10.0	17.0
5	江高峰	中山大学肿瘤防治中心实验研究部	8	25	3.0	4.0
6	陈艳	中山大学肿瘤防治中心病理科	22	114	4.0	10.0