人CCL21基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 侯丽 崔彬 张捷 焦玉莲 王来城 赵跃然 马春燕
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: CCL21 真核表达 COS-7细胞 电穿孔
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 265-268
• 页数: 4页
• 分类号: R573
• 字数: 2978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2005.04.001

摘要

为了构建可在哺乳动物细胞内高效表达人次级淋巴组织趋化性细胞因子(hCCL21)的真核表达质粒pVAX1-hCCL21,以便用于hCCL21基因治疗研究.以BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组克隆pSK-hCCL21,胶回收约540 bp的hCCL21目的基因片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pVAX1的相应酶切位点,转化后进行菌落PCR分析和BamHⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定.阳性克隆提取质粒,体外电穿孔法转染COS-7细胞,Western blot法检测转染细胞中hCCL21的瞬时表达,趋化小室法检测表达产物对淋巴细胞的免疫趋化作用.结果显示,菌落PCR和酶切鉴定证实,目的基因hCCL21正确插入到真核表达载体pVAX1中,转染COS-7细胞后,细胞培养上清及裂解产物中可检测到重组蛋白hCCL21的表达,并且表达产物对人外周血单个核细胞有明显的趋化活性.已成功构建了可在哺乳动物细胞内高效表达hCCL21基因的真核表达质粒pVAX1-hCCL21,为进一步研究hCCL21基因治疗肿瘤奠定了基础.