人尿激酶原突变体的构建及其特性的研究

• 作者: 于永生 卢建申 吴晓洁 周艳 李青旺 邓继先
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PCR点突变 人尿激酶原突变体 凝血酶 纤溶酶原激活剂抑制剂
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 细胞工程
• 页码范围: 573-578
• 页数: 6页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 5632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.013

摘要

由于人尿激酶原(pro-UK)存在凝血酶和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)的作用位点,在生产和治疗过程中容易失去活性.采用PCR介导的定点突变技术对pro-UK基因进行了突变,构建了3种人pro-UK突变体,分别将蛋白序列中的凝血醇作用位点Arg156突变成His156,构建成pro-UKM1;将PAI-1的作用位点Arg178、Arg179、Arg181突变为Lys178、Ly 179、His181构建成proUKM2;同时将凝血酶和PAI-1的作用位点突变构建成pro-UKM3.分别在CHO细胞中获得稳定表达.并对3种突变体进行了SDS-PAGE纤维蛋白自显影和Westem blot分析,证明3种细胞表达的pro-UKM与天然尿激酶原带型一致,绝大多数为单链.体外溶栓试验表明,pro-UKM1对凝血酶有抵抗性,pro-UKM2对PAI有抵抗性,pro-Ukm3能有效抵抗凝血酶和PAI的活性抑制.特别是pro-UKM3具有开发成新型溶血栓药物的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓继先	军事医学科学院生物工程研究所	72	564	13.0	19.0
2	吴晓洁	军事医学科学院生物工程研究所	15	73	5.0	7.0
3	李青旺	西北农林科技大学动物科技学院	119	1155	18.0	27.0
4	于永生	西北农林科技大学动物科技学院	18	339	12.0	18.0
6	卢建申	军事医学科学院生物工程研究所	5	47	4.0	5.0
9	周艳	军事医学科学院生物工程研究所	1	8	1.0	1.0