人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达

• 作者: 井健 尹吉伟 岳俊杰 李森
• 来源期刊: 北京师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 尿激酶原 KGD序列 边侧序列 纤溶活性 血小板聚集抑制活性
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 页码范围: 554-557
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0476-0301.2007.05.018

摘要

采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138～139位点插入了赖氨酸甘氨酸天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW, proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34 μkat·mL-1, 细胞密度为106·mL-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×104,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	井健	北京师范大学生命科学学院	18	17	2.0	3.0
2	岳俊杰		26	108	6.0	9.0
3	李森	北京师范大学生命科学学院	33	201	6.0	14.0
4	尹吉伟	北京师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0