猪生殖与呼吸综合征病毒CH-1a株GP5蛋白基因的表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 仇华吉 刘金霞 周艳君 安同庆 彭金美 王云峰 田志军 童光志 薛强
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 猪生殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 859-864
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4776字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.11.004

摘要

将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5蛋白基因信号肽部分删除后克隆于pGEX-6p-1载体上,并在大肠埃希氏菌中进行表达.经SDS-PAGE电泳分析发现,融合表达的rtGP5蛋白约42ku,将融合蛋白rtGP5用PRRSV阳性血清进行Western-blotting分析,证实所表达的融合蛋白能被其特异性识别.收获融合表达产物rtGP5,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c 小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以融合蛋白rtGP5和GST蛋白为抗原,通过间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆,结果得到了15株能稳定分泌抗rtGP5蛋白抗体的阳性细胞克隆株.经间接免疫荧光检测发现,获得的15株单克隆抗体都能与PRRSV感染细胞产生特异性荧光.15株单克隆抗体亚型鉴定结果显示均为IgG1型,且轻链均为κ链.