用基于"Neo/E"的技术构建重组质粒

• 作者: 周建光 李山虎 李杰之 王健 黄翠芬
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Red重组酶 重组工程 反选择技术
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 520-523
• 页数: 4页
• 分类号: Q812
• 字数: 3322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.003

摘要

根据重组工程原理,建立了一种用于构建重组质粒的"neo/E"(抗生素/单酶切位点)选择与反选择新方法.首先采用PCR方法扩增出线性打靶分子:然后进行两步体内同源重组,(1)neo/E基因敲入,重组子呈现neo抗性表型;(2)目的基因替换neo/E基因.用限制酶E消化时,发生第二步重组的DNA分子不能被消化,能够转化大肠杆菌受体菌DH5α.应用该方法构建了重组质粒pGL3-Basic PC1900T.PCR及测序鉴定证明:外源片段重组率为20%,所建立的重组工程选择与反选择新技术为质粒构建提供了新的解决方案.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄翠芬	军事医学科学院生物工程研究所	113	787	15.0	23.0
2	王健	军事医学科学院生物工程研究所	27	78	5.0	7.0
3	周建光	军事医学科学院生物工程研究所	74	296	8.0	14.0
4	李山虎	军事医学科学院生物工程研究所	27	69	5.0	6.0
5	李杰之	军事医学科学院生物工程研究所	31	178	6.0	12.0