荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

• 作者: 周冬生 张玲 杨瑞馥 王津 翟俊辉 郭兆彪
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 炭疽芽孢杆菌 荧光定量PCR 荚膜因子 水肿因子 LightCycler
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 976-980
• 页数: 5页
• 分类号: R378.7
• 字数: 4046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.11.012

摘要

目的利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于炭疽芽孢杆菌的快速检测.方法采用SYBR Green Ⅰ随机掺入法,利用本实验室建立的实时荧光定量PCR反应体系,根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子设计引物,同时检测两个毒力相关质粒的存在,检测其灵敏度和特异性,并以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定14株炭疽芽孢杆菌,并测试该法检测土壤模拟污染标本的灵敏度,实验中设置内对照以排除假阴性结果的存在.结果炭疽杆菌基因组DNA的检测灵敏度可达每反应体系0.53pg,两个克隆株提取质粒的检测限分别为每反应体系12拷贝、140拷贝;检测14株炭疽芽孢杆菌及29株非炭疽芽孢杆菌的PCR扩增结果表明,炭疽芽孢菌DNA均出现特异的扩增结果,29株对照菌的DNA均为阴性;土壤模拟污染标本检测灵敏度可达每反应体系36个芽孢;20次重复实验结果表明其平均值与标准差为14.602±0.640.结论该方法检测炭疽芽孢杆菌具有简便、快捷、灵敏度高和特异性好的特点,为临床诊断、环境监测、卫生防疫等方面,快速检出炭疽芽孢杆菌提供了有利的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	翟俊辉	军事医学科学院微生物流行病研究所	27	568	14.0	23.0
2	杨瑞馥	军事医学科学院微生物流行病研究所	180	1706	21.0	33.0
3	张玲	军事医学科学院微生物流行病研究所	7	131	4.0	7.0
4	周冬生	军事医学科学院微生物流行病研究所	36	288	10.0	15.0
5	郭兆彪	军事医学科学院微生物流行病研究所	47	474	13.0	20.0
6	王津	军事医学科学院微生物流行病研究所	30	378	11.0	18.0