定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

• 作者: 何宁 史清海 周冬生 周蕾 曲识 杨瑞馥 翟俊辉 郭兆彪 陈永胜
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 炭疽芽孢杆菌 实时荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 275-279
• 分类号: R378.72
• 字数: 5237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.03.021

摘要

目的 建立一种简便、快速、定量检测炭疽芽孢杆菌的PCR方法.方法 采用TaqMan荧光探针技术,针对炭疽芽孢杆菌质粒pXO1、pXO2上的基因设计引物;用炭疽芽孢杆菌(Sterne株)污染环境土壤来模拟实际样本,比较了从土壤中提取DNA的不同方法对检测效果的影响,并与同类进口试剂进行了平行比对.结果 以含有检测目的 片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度可达到101拷贝/μl;用Sterne株芽孢悬液污染土壤,检测灵敏度可达2.5×103cfu/g土壤.我们研制的试剂与进口试剂在敏感性和准确性方面一致,且操作简便. 结论本研究建立的炭疽芽孢杆菌实时定量PCR检测方法可特异、灵敏地检测土壤标本中可疑目标菌.