猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 何启盖 刘正飞 吴斌 徐晓娟 李涛 梁望旺 陈焕春
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 apxⅡ 表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 145-147
• 页数: 3页
• 分类号: S852.619
• 字数: 4391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2005.02.011

摘要

将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的质粒pET-ApxⅡ转化到大肠杆菌BL21(DE3).挑选出表达量最高的克隆子,于37℃经IPTG诱导表达.对表达条件进行优化,并对包涵体进行了提纯和复性.用复性后的蛋白作抗原,建立了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接ELISA.试验的最佳反应条件为:最佳抗原稀释度为1:160,抗原包被液用Tris-HCl(pH8.0),封闭液用含0.4%BSA的PBST,血清稀释度为1:40,二抗稀释度为1:6 000,稀释液用含0.4% BSA的PBST,血清反应时间为30 min,二抗反应时间为45 min,底物反应时间为20 min.与间接血凝(IHA)检测结果比较,建立的ELISA诊断方法具有良好的稳定性和可重复性,并具有较高的特异性和敏感性.用建立的间接ELISA对2 503份临床送检血清进行了血清流行病学调查,结果表明,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性率为63%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐晓娟	华中农业大学畜牧兽医学院	23	359	11.0	18.0
2	陈焕春	华中农业大学畜牧兽医学院	331	4866	36.0	53.0
3	何启盖	华中农业大学畜牧兽医学院	170	2510	25.0	42.0
4	吴斌	华中农业大学畜牧兽医学院	104	1687	21.0	36.0
5	刘正飞	华中农业大学畜牧兽医学院	40	892	15.0	29.0
6	李涛	华中农业大学畜牧兽医学院	11	114	7.0	10.0
7	梁望旺	华中农业大学畜牧兽医学院	1	8	1.0	1.0