人毛乳头细胞HSPC016基因在毕赤酵母中的表达和鉴定

• 作者: 叶庆佾 宋志强 易勇 杨希川 杨斌 邹锋 郝飞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 毛乳头细胞 HSPC016基因 毕赤酵母,真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（14）
• 所属期刊栏目: 临床医学
• 页码范围: 1481-1483
• 页数: 3页
• 分类号: R322.991|R394-33|R394.3
• 字数: 2136字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.14.019

摘要

目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的真核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定.方法用PCR从pET-28a(+)/HSPC016中扩增出195 bp目的基因,克隆至酵母表达载体pPIC9K质粒,经酶切鉴定后转化毕赤酵母菌GS115,G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导表达后进行Western blot检测和目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定.结果用PCR成功扩增出目的基因;pPIC9K/HSPC016转化GS115用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白相对分子量约为7.2×103,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约18%;Western blot检测具有良好的免疫反应性;N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致.结论HSPC016基因能通过酵母表达载体pPIC9K及宿主菌GS115进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因在真核细胞水平表达的生物学意义奠定了基础.