抗肝癌单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40的构建及其导向作用的实验研究

• 作者: 刘彦仿 李鹏 胡川闽 郭建秀 陈安
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞肝癌 单链抗体 免疫毒素 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2005,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2209-2212
• 页数: 4页
• 分类号: R392.2|R394-33|R735.7
• 字数: 4228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.22.004

摘要

目的构建单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40并探讨其导向细胞毒作用.方法采用亚克隆技术,首先将HAb25(scFv)与绿脓杆菌外毒素基因突变子PE40,在ply5载体上构建HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pBV220原核表达载体中, 转化DH5α宿主菌,温度诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法;间接免疫荧光染色鉴定HAb25(scFv)-PE40与肝癌细胞结合的特异性;体外导向细胞毒实验明确其是否具有选择性靶细胞杀伤活性.结果限制性酶切图谱和序列分析证实在ply5载体上成功地构建了HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;该单链免疫毒素基因在pBV220载体中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的43.3%;纯化后的HAb25(scFv)-PE40间接免疫荧光染色显示具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特性;导向细胞毒实验结果显示HAb25(scFv)-PE40具有明确的选择性靶细胞杀伤活性. 结论已成功构建和高效表达了单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40,该免疫毒素有选择性地杀伤靶肝细胞的生物活性 (P＜0.001),为其进一步的基础和临床应用研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘彦仿	第四军医大学病理学教研室	110	509	12.0	15.0
2	郭建秀	第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室	25	122	6.0	10.0
3	陈安	第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室	33	411	7.0	20.0
4	李鹏	第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室	67	677	9.0	24.0
5	胡川闽	第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室	56	209	7.0	11.0