抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测

• 作者: 杨颖 毛伟平 纪洪帅 郭锦瑞
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7-H4 单链抗体 绿脓杆菌外毒素PE38KDEL 重组免疫毒素 靶向治疗
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 354-361,366
• 页数: 9页
• 分类号: R392.11
• 字数: 8539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.03.008

摘要

目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(scFv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用.方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体 pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot 鉴定;间接ELISA 和流式分析技术进行特异性鉴定.利用MTT法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析.结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长.结论:成功构建了基于抗B7-H4单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	纪洪帅	江苏省分子医学重点实验室南京师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
2	郭锦瑞	江苏省分子医学重点实验室南京师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
3	杨颖	江苏省分子医学重点实验室南京师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
4	毛伟平	江苏省分子医学重点实验室南京师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0