新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定

• 作者: 习彩霞 关海容 刘楠 奚永志 孙玉英 张惠丽 梁飞 袁志宏 郭斯启
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组外毒素融合蛋白 B7-2-PE40KDEL 肽谱 抗原特异性 生物学活性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 157-160,166
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3863字
• 语种: 中文

摘要

目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定.方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性.结果:B7-2-PE40KDEL经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为72 628,与理论预测值69 561相比误差在5%之内;全波长扫描分析显示该目的蛋白分别在225 nm和276 nm处各有一吸收峰;MALTI-TOF-MS质谱测定共获得15个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为60 000～80 000的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与我们预测的目的蛋白相符;Western blot实验显示B7-2-PE40KDEL能与人B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT杀伤活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28+的人T淋巴瘤细胞系Jurkat产生特异性杀伤,而对不表达的CD28-淋巴细胞系Raji无任何杀伤.结论:重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白为一全新的具有靶向B7:CD28细胞杀伤活性的蛋白质.