新型重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白复性及纯化

• 作者: 刘楠 奚永志 孙玉英 崔建武 梁飞 郭斯启
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 重组外毒素融合蛋白 IL-6 D24-PE40KDEL 包涵体 变性 复性 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 523-526
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.06.007

摘要

目的:对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化.方法:对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性,经离子交换层析.结果:工程菌HB101/pE01T的表达产物是以包涵体形式存在,菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后,再超声破碎效果最好;包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次,再用8 mol/L尿素洗涤一次效果更优;最佳变性条件为在7 mol/L盐酸胍中加入 0.065 mmol/L的DTT和0.2 mol/L的盐酸精氨酸;最佳复性条件为在10℃复性保持24 h,蛋白浓度保持在30～ 80 μg/ml,并需加入0.2 mol/L盐酸精氨酸;利用谷胱甘肽的氧化还原法,当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在 2∶ 1时所获得的活性成分得率最高;利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95%的目的蛋白,所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞.结论:本研究获得重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线.