肝癌相关新基因BC047440反义真核表达载体构建及鉴定

• 作者: 周建波 李靖 杨彤翰 梁平 赵弘智 郑璐 黄小兵
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 BC047440 反义基因 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（15）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1607-1609
• 页数: 3页
• 分类号: R394-33
• 字数: 3230字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.15.026

摘要

目的构建肝癌相关新基因BC047440反义真核表达载体.方法提取人肝癌组织总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440基因cDNA序列,经与pMD18-T simple载体连接,筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的BC047440基因cDNA序列反向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建BC047440基因反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS.结果经RT-PCR获得826 bp含限制性内切酶位点的cDNA片段,T载体克隆后经PCR扩增目的片段、测序,确定该片段为BC047440基因cDNA,进而构建反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS,并经PCR扩增目的片段,测序确证.结论成功构建了BC047440基因反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS,为进一步研究该基因功能奠定了基础.通过抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH)对肝癌组织与癌旁肝组织间差异表达基因进行分离、鉴定,我们发现了1条新的肝癌相关基因cDNA片断(EST)[1],长447 bp,经GenBank检索,90%与已知基因无同源性.进一步采用RACE技术,克隆出该基因的全长cDNA序列[2].经GenBank检索,与近期登录的基因BC047440同源.但该基因是从大脑组织中获得[3],而且国内外少见该基因功能研究的报道.在此基础上,本研究从原发性肝癌组织中克隆了BC047440基因的全长cDNA序列,并构建了其反义RNA真核表达载体,为进一步研究该基因功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁平	第三军医大学新桥医院肝胆外科	126	612	12.0	16.0
2	杨彤翰	第三军医大学新桥医院肝胆外科	46	262	9.0	14.0
3	李靖	第三军医大学新桥医院肝胆外科	83	480	12.0	17.0
4	黄小兵	第三军医大学新桥医院肝胆外科	57	283	10.0	13.0
5	郑璐	第三军医大学新桥医院肝胆外科	43	235	8.0	12.0
6	赵弘智	第三军医大学新桥医院肝胆外科	18	122	7.0	10.0
7	周建波	第三军医大学新桥医院肝胆外科	7	31	3.0	5.0