人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化

• 作者: 伍欣星 刘金花 吴承龙 彭敏 朱丽琴 解庭波 许蓓妮
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: HPV16 E7 基因 重组 原核表达 优化
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 415-420,432
• 页数: 7页
• 分类号: Q753
• 字数: 5094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8852.2006.04.001

摘要

目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台.方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coli BL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性.优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白.结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB.结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达.