鸭病毒性肠炎病毒基因文库的构建及其核衣壳蛋白基因的发现、克隆与鉴定

• 作者: 刘一尘 周伟光 徐超 文明 汪铭书 程安春 袁桂萍 贾仁勇 郭宇飞
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭病毒性肠炎病毒 基因文库 核衣壳蛋白基因
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 948-953
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 4208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2006.09.014

摘要

提取鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组DNA,超声波处理使其片段化,经补平末端后,分级分离并收集各部分DNA片段,与质粒pBluescript Ⅱ SK(+)连接,转化大肠杆菌DH5α,成功构建了DEV基因文库.随机选取文库中的重组质粒测序分析,DNA序列拼接后获得大于100bp以上ORF共187个,将其中一个含完整ORF的DNA片段,以BLASTX软件与Genbank上相应基因进行比对分析,初步确定为一种核衣壳蛋白基因.根据该基因片段序列,设计引物对DEV DNA进行PCR扩增,并克隆到pGEM-T载体上,转化宿主菌JM109,提取阳性重组质粒,经PCR检测、酶切鉴定、测序和生物信息学分析,确定该基因片段为DEV核衣壳蛋白基因.