受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ转基因载体的构建及其在细胞水平上的有效性检测

• 作者: 杨晓 绳纪坡 藤艳 邓继先
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 蜕皮激素 转基因 Cre/LoxP重组 转染
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 415-418,423
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2006.05.004

摘要

目的:构建一种可以在哺乳动物细胞中蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体,为制备受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因小鼠奠定基础.方法:利用分子克隆技术构建受控型蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的转基因载体;将其电转至AM1菌中,利用其中的Cre重组酶将载体上两个同向LoxP序列锚定的新霉素(neomycin)基因删除,解除其对蜕皮激素诱导表达系统的阻断作用,利用PCR、酶切和测序鉴定删除情况;将重组后的载体转染至COS7细胞中进行瞬间表达,蜕皮激素诱导后回收培养上清和细胞裂解物进行Western印迹分析,检测hIGF-Ⅰ的表达情况.结果和结论:成功构建大小为13.6 kb的转基因载体pCE-IGF-Ⅰ;转化至AM1中后,PCR、酶切和测序的结果都证明其中的Cre酶能够将载体上neomycin基因删除;重组后的载体转染至COS7细胞中进行诱导表达,Western印迹实验证明截短型hIGF-Ⅰ能够在COS7细胞中顺利表达.上述结果证明该蜕皮激素诱导表达截短型hIGF-Ⅰ的受控型转基因载体能够用于转基因小鼠的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	绳纪坡		3	8	2.0	2.0
2	杨晓		3	27	2.0	3.0
3	邓继先		2	6	1.0	2.0
4	藤艳		1	0	0.0	0.0