葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究

• 作者: 严杰 徐水凌 毛亚飞 罗冬娇
• 来源期刊: 浙江大学学报（理学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素B SEB基因/克隆 原核表达系统/构建 重组蛋白/表达 细胞毒性 淋巴细胞/增殖 肿瘤细胞/抑制
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 553-558
• 页数: 6页
• 分类号: R37
• 字数: 3811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1008-9497.2006.05.019

摘要

构建葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用.采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段,T-A克隆后测序,构建SEB基因原核表达系统PET32a-SEB-E.coliBL21DE3.采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEB.采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值.采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝腺癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用.与公布的相关序列比较,所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100%.rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%.rSEB对Vero细胞的TCIC50为3.02μg.5.0～20.0μg/ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P＜0.05).5.0～20.0μg/mlrSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P＜0.05).本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统.rSEB仍然具有生物学活性.所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	徐水凌	浙江大学医学院病原生物学教研室	54	224	8.0	12.0
5	罗冬娇	杭州师范学院基础医学部	52	209	9.0	11.0