葡萄球菌肠毒素A基因原核表达系统的构建及其表达产物的鉴定

• 作者: 严杰 张梅光 徐水凌 毛亚飞 罗冬娇
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素A 基因表达 原核表达 HepG2细胞 HeLa细胞 Vero细胞
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 163-167
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.01.037

摘要

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用.方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-SEA-E.coliBL21DE3.采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA.采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值.采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用.结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100%.rSEA表达量约为细菌总蛋白的25%.rSEA对Vero细胞的TCIC50为3.14 μg.1.0-20.0 mg/L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P＜0.05).5.0-20.0 mg/L rSEA作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P＜0.05).结论:成功地构建了rSEA原核表达系统.rSEA仍然具有生物学活性.所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEA突变体的筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张梅光	嘉兴学院医学院微生物与免疫学教研室	23	88	6.0	8.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
3	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
4	徐水凌	浙江大学医学院病原生物学教研室	54	224	8.0	12.0
6	罗冬娇	杭州师范学院基础医学部	52	209	9.0	11.0