藏绵羊朊蛋白基因的原核表达

• 作者: 刘湘涛 吴润 谢庆阁 陈豪泰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 重组朊蛋白 藏绵羊 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 859-863
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.7|Q786
• 字数: 4638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.11.001

摘要

从藏绵羊全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPc)基因.测序分析表明,所克隆的羊PrPc基因片段大小为771 bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,其与国内外报道的序列基本相同.将目的基因与经EcoRⅠ和Xho Ⅰ酶切的载体pGEX-4T-1连接后转化宿主菌BL21(DE3),挑选重组阳性菌用IPTG诱导表达,收集不同培养时间的菌液进行SDS-PAGE和Western-blotting.结果表明,PrP基因在大肠杆菌中成功表达,并能被抗牛PrPc单抗4C11识别.凝胶薄层扫描结果显示,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%～45%,目的蛋白以包涵体的形式存在,包涵体经变性裂解、纯化和复性后得到具有一定生物学活性的目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴润	甘肃农业大学动物医学院	108	576	13.0	19.0
2	陈豪泰		6	12	2.0	3.0
3	刘湘涛		8	20	3.0	4.0
4	谢庆阁		10	46	4.0	6.0