绵羊eIF3h基因克隆、原核表达及蛋白鉴定

• 作者: 于常江 张云生 杨华 杨永林 沈敏 祁成年
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 eIF3h基因 基因克隆 载体构建 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 页码范围: 386-392
• 页数: 7页
• 分类号: S827|S188
• 字数: 4648字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2017.02.023

摘要

[目的]克隆绵羊真核翻译起始因子eIF3h,构建原核表达载体,并诱导外源蛋白表达,检测、鉴定带有His标签的目的蛋白.[方法]根据Genbank中绵羊eIF3h基因CDS序列设计引物,PCR特异扩增DNA片段,酶切、连接至pET28α(+)载体,将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株中诱导eIF3h蛋白表达.采用SDS-PAGE电泳分析目的蛋白表达情况,利用Western blot技术检测、鉴定目的蛋白.[结果]正确、完整的克隆到绵羊eIF3h基因CDS区序列,片段全长1 059 bp.将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株后,在37℃,1 mmol/L浓度的IPTG诱导3.5 h后获得以包涵体形式存在的目的蛋白,分子量大小约为40 kD.[结论]获得了完整、正解的绵羊eIF3h基因CDS区序列片段,构建了该基因的原核表达载体,成功诱导了绵羊eIF3h基因外源表达的目的蛋白,为绵羊eIF3h基因的后续研究提供了科学数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	祁成年	塔里木大学动物科学学院	19	94	5.0	9.0