日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

• 作者: 倪娟 周志明 赵晓勤 陈立侨 顾志敏
• 来源期刊: 华东师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 日本沼虾 PCR 优化
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学 环境科学
• 页码范围: 68-74,87
• 页数: 8页
• 分类号: Q503
• 字数: 3415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5641.2006.02.011

摘要

以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为:在25 μL反应体系中,10×Buffer 2.5μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,引物0.4 μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95℃预变性5 min;接着35个循环包括95℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunit I,COI),NADH脱氢酶亚基V(NADH dehydrogenase subunit 5,ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈立侨	华东师范大学生命科学学院	209	4307	36.0	50.0
2	周志明		39	459	11.0	20.0
3	顾志敏		63	819	16.0	27.0
4	赵晓勤	华东师范大学生命科学学院	9	338	8.0	9.0
5	倪娟	华东师范大学生命科学学院	5	205	5.0	5.0