50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

• 作者: 刘秋英 张美英 熊盛 王一飞 钱垂文 黄立
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 核苷二磷酸激酶 中试 发酵 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4259字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.10.001

摘要

中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并对表达产物进行纯化.摇瓶培养一级种子至合适密度,以10%比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体裂解后,经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品.结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为1560g/批,NDPK-A表达量为23.8%.另外,补料方式对发酵密度有明显影响.与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量的提高不明显.在较优条件下,菌体产量为(2220.00±169.71)g/批,蛋白表达量为(22.00±0.42)%,纯化后重组蛋白得率为510mg/L.产物可溶、密度适中、工艺简便的中试发酵条件的建立为高得率、大规模制备重组rhNDPK-A奠定了基础.