P4501A1基因Thr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体的构建

• 作者: 任铁玲 刘移民 招小林 王辉 肖勇梅 魏青
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 定点突变 CYP1A1 测序分析
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 540-542
• 页数: 3页
• 分类号: Q3
• 字数: 2412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8020.2006.05.004

摘要

目的 构建P4501A1基因cDNA Thr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体,为进一步研究CYP1A1的功能和致癌机制奠定基础.方法 根据人CYP1A1基因(GeneBank NM-000499)cDNA序列设计通用引物Pm3/Pm4和突变引物Pt15/Pt16;Pt17/Pt18,内含酶切位点和突变位点,先用Pm3/Pt16,Pm3/Pt18组成两对引物,以pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第一轮扩增,获得上游1397bp片断,再用Pt15/Pm4,Pt17/Pm4组成两对引物以10ng pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第二轮扩增,得到下游177bp片断.然后用Pm3/Pm4做引物以第一、第二轮扩增产物为模板进行第三轮扩增,获得的1.5kb扩增产物用1%琼脂糖凝胶分离并回收纯化,将纯化的PCR产物与pMD-T载体连接后转化大肠埃希菌DHα5感受态细胞,挑单克隆扩增、质粒抽提后进行酶切和测序鉴定.结果 三轮PCR扩增得到的1.5kb片断,经内切酶BamHⅠ和SalⅠ消化和T7p和SP6通用引物进行双向测序,证实克隆的目的片段与GeneBank中人CYP1A1基因cDNA的序列同源性为99.9%,且包含两个设计的突变位点Asn461、Val462.结论 本实验成功地构建了含突变位点Asn461、Val462的CYP1A1基因cDNA的片断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏青	中山大学公共卫生学院	61	317	9.0	16.0
2	任铁玲	中山大学公共卫生学院	21	238	8.0	15.0
3	王辉	中山大学公共卫生学院	106	610	13.0	19.0
4	肖勇梅	中山大学公共卫生学院	30	126	7.0	9.0
5	刘移民		43	99	6.0	9.0
6	招小林	中山大学公共卫生学院	6	8	2.0	2.0