巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

• 作者: 侯孟君 凌文华 刘移民 招小林 肖勇梅 魏青
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 巢式-PCR 细胞色素P450基因 T载体 测序分析
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1046-1048
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 1844字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2005.08.014

摘要

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM-T载体.方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5a,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行测序分析.结果重组质粒PCR扩增得到1568的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%.结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法,可用于基因的检测和载体的构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	凌文华	中山大学公共卫生学院预防医学系	176	1551	20.0	28.0
2	魏青	中山大学公共卫生学院预防医学系	61	317	9.0	16.0
3	侯孟君	中山大学公共卫生学院预防医学系	17	90	5.0	9.0
4	肖勇梅	中山大学公共卫生学院预防医学系	30	126	7.0	9.0
5	刘移民		43	99	6.0	9.0
6	招小林	中山大学公共卫生学院预防医学系	6	8	2.0	2.0