青海花斑裸鲤肝胰腺组织cDNA文库的构建

• 作者: 赵霞
• 来源期刊: 农业科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: cDNA文库 青海裸鲤 肝胰腺组织 SMART
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: Q174
• 字数: 3576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0747.2006.02.004

摘要

构建青海花斑裸鲤肝胰腺组织的cDNA文库并鉴定文库质量.提取青海花斑裸鲤肝胰腺组织总RNA,利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术, 使用含有SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物和含有SfiⅠA酶切位点的SMART IVTM寡核苷酸,在PowerScriptTM逆转录酶作用下,运用mRNA5'末端的模板转换方法合成cDNA第一链 .利用LD PCR(long-distance PCR)扩增双链cDNA,经SfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切后,通过 CHROMA SPIN-400柱进行分级分离去除＜500 bp的片段,再同经SfiⅠ酶切的λTrip IEx2载体连接,体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中,进行文库滴度和重组率的测定,然后扩增文库并随机挑取30个噬菌斑进行PCR反应鉴定插入片段大小.构建的cDNA文库滴度为1.8×106pfu/mL,重组率＞98%,文库扩增后滴度达8×109pfu/mL,插入片段长度在0.37～3.5 kb之间,平均长度为1.56 kb.文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆青海花斑裸鲤肝胰腺组织特异表达基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵霞	青海大学医学院组织胚胎学教研室	4	9	2.0	3.0