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青海花斑裸鲤肝胰腺组织cDNA文库的构建
青海花斑裸鲤肝胰腺组织cDNA文库的构建
作者:
赵霞
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
cDNA文库
青海裸鲤
肝胰腺组织
SMART
摘要:
构建青海花斑裸鲤肝胰腺组织的cDNA文库并鉴定文库质量.提取青海花斑裸鲤肝胰腺组织总RNA,利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术, 使用含有SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物和含有SfiⅠA酶切位点的SMART IVTM寡核苷酸,在PowerScriptTM逆转录酶作用下,运用mRNA5'末端的模板转换方法合成cDNA第一链 .利用LD PCR(long-distance PCR)扩增双链cDNA,经SfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切后,通过 CHROMA SPIN-400柱进行分级分离去除<500 bp的片段,再同经SfiⅠ酶切的λTrip IEx2载体连接,体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中,进行文库滴度和重组率的测定,然后扩增文库并随机挑取30个噬菌斑进行PCR反应鉴定插入片段大小.构建的cDNA文库滴度为1.8×106pfu/mL,重组率>98%,文库扩增后滴度达8×109pfu/mL,插入片段长度在0.37~3.5 kb之间,平均长度为1.56 kb.文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆青海花斑裸鲤肝胰腺组织特异表达基因奠定了基础.
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文献信息
篇名
青海花斑裸鲤肝胰腺组织cDNA文库的构建
来源期刊
农业科学研究
学科
生物学
关键词
cDNA文库
青海裸鲤
肝胰腺组织
SMART
年,卷(期)
2006,(2)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
15-19
页数
5页
分类号
Q174
字数
3576字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1673-0747.2006.02.004
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
赵霞
青海大学医学院组织胚胎学教研室
4
9
2.0
3.0
传播情况
被引次数趋势
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(/年)
引文网络
引文网络
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研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
农业科学研究
主办单位:
宁夏大学
出版周期:
季刊
ISSN:
1673-0747
CN:
64-1056/S
开本:
大16开
出版地:
宁夏银川西夏区文萃北街217号
邮发代号:
74-9
创刊时间:
1980
语种:
chi
出版文献量(篇)
1972
总下载数(次)
5
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