插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

• 作者: 于春梅 曹瑞兵 王敏秀 苏鑫铭 陈溥言
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 TK基因 Cre loxP GFP重组病毒
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.10.007

摘要

根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP.克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP.基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRV SH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1.将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2.PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代.LD50试验表明rPrV2的毒力下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	269	2875	28.0	40.0
2	曹瑞兵	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	71	897	19.0	28.0
3	王敏秀	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	2	12	2.0	2.0
4	苏鑫铭	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	8	81	4.0	8.0
5	于春梅	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	3	13	3.0	3.0