兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用

• 作者: Visentin Gian Paolo 刘莉 刘超燕 孙启鸿 杨金菊 柳晓兰 高媛 高建恩
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CXCR3-B 多克隆抗体 多肽抗原
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 223-226
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3569字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.02.030

摘要

目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果: 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000(0.1 mg/L), 1∶ 4 000(3 mg/L)和1∶ 1 000(10 mg/L).3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论: 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.