南极深海沉积物宏基因组DNA中低温脂肪酶基因的克隆、表达及性质分析

• 作者: 张金伟 曾润颖
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 南极深海沉积物 宏基因组 低温脂肪酶 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1207-1214
• 页数: 8页
• 分类号: Q5
• 字数: 5711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2006.12.011

摘要

从南极普利兹湾深海900米深的沉积物中提取获得宏基因组DNA,并通过设计引物,从中克隆到全长为948 bp的低温脂肪酶(lip3)开放阅读框完整序列,该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557 ku酶蛋白(Lip3);氨基酸序列上的GFGNS(GXGXS)和G-N-S-M-G(GXSXG)在许多脂肪酶中有很高的保守性,它们是水解机制所必需的序列,也是丝氨酸水解酶中最保守的序列.构建了lip3基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得表达,采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化,得到约35 ku蛋白条带,酶学性质的分析表明,该酶的最适作用温度为25℃,在0℃时表现为最高活力的22%,最适pH值为8.0,对热敏感,35℃热处理60 min剩余酶活为10%,以硝基苯棕榈酸酯为底物,Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高,是典型的低温酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张金伟	国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室	9	116	6.0	9.0
2	曾润颖	国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室	37	494	12.0	21.0