同源异形盒Gax基因重组腺病毒载体的构建及其鉴定

• 作者: 丁士芳 冯进波 刘平 姜虹 季晓平 张澄 张运 王荣
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: Gax基因 基因,同源盒 腺病毒科 缺陷病毒 同源重组
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: Q753
• 字数: 5536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2006.01.015

摘要

目的:构建同源异形盒Gax基因的复制缺陷型腺病毒载体,并对其是否重组成功进行鉴定.方法:采用两步CaCl2转化法的DNA细菌内同源重组技术,PCR扩增小鼠Gax基因,将Gax基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,转染含有5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1(33.5 kb)的BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带Gax基因的重组腺病毒载体pAd-Gax,经限制性内切酶Bst Ⅸ和Pac Ⅰ鉴定正确后,用脂质体法转染293细胞,包装产生携带Gax基因的重组腺病毒Ad-Gax.利用GFP的表达鉴定Ad-Gax.结果:构建了表达Gax基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1010 pfu/L.结论:成功地构建了表达Gax基因的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究Gax基因在心血管病中的作用提供了实验基础.