表达增强型绿色荧光蛋白K562细胞株的建立及其检测自然杀伤细胞活性的效果评价

• 作者: 刁智娟 刘红云 刘静 朱慧芬 杨道锋 梁智辉 沈关心
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 杀伤细胞 流式细胞术 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 550-553
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2744字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2006.06.027

摘要

目的建立一种准确、稳定的自然杀伤细胞(NK)活性检测方法.方法通过电穿孔法将含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒转入K562细胞,经G418筛选后进行克隆,获得EGFP阳性表达细胞株;采用流式细胞仪和乳酸脱氢酶法检测10名健康人外周血NK细胞活性.结果通过基因转染的方法得到1株稳定表达EGFP的K562细胞,转染EGFP对细胞生长无影响,10名健康人外周血NK细胞对转染EGFP的细胞及未转染细胞的杀伤活性无差异(P＞0.05);表达EGFP的K562细胞在效靶比为40:1时,用流式细胞仪检测培养2和4 h时的NK细胞杀伤率分别为(21.5±1.3)%和(23.7±1.5)%,二者无差异(P＞0.05);而用乳酸脱氢酶法测定培养4 h的NK细胞对K562和EGFP-K562的杀伤率[分别为(23.6±2.3)%和(23.7±2.3)%]均高于2 h的杀伤率[(18.0±1.1)%和(18.2±1.3)%,P＜0.05].结论成功建立了表达EGFP的K562细胞株,将该细胞株作为靶细胞用于流式细胞术检测NK细胞活性时,无需预先染色和标记靶细胞,且操作简便、省时、稳定、可靠.