以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘明 张云 张序 王立群 耿宏伟 胡奇林 郭东春
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭呼肠孤病毒 σC编码基因 原核表达 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 171-176
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.4|R446.61
• 字数: 5440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.03.001

摘要

将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,获得了重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞后,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应;以0.15 mmol/L IPTG诱导,5 h后融合蛋白σC表达量可达高峰,分子质量为50 ku;融合蛋白纯化后被用作包被抗原,建立了检测鸭血清中呼肠孤病毒抗体的间接ELISA,经对检测条件优化,最佳包被浓度为5 μg/mL,标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶40.用该方法对50份鸭血清样品进行了检测,与琼脂扩散抗体检测法相比,ELISA具有良好的特异性和敏感性.