大肠杆菌重组LTKA63突变体和LTB黏膜免疫佐剂活性的研究

• 作者: 严杰 夏肖萍 胡野
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 LTKA63基因 LTB基因 克隆/表达载体构建 重组蛋白/表达 黏膜免疫 佐剂活性
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 354-359
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.04.015

摘要

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A,LTA)突变体LTKA63及B亚单位(heat-labile enterotoxin subunit B,LTB)基因原核表达系统,确定rLTKA63和rLTB黏膜免疫佐剂活性.方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA和LTB基因,采用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序.构建LTKA63和LTB原核表达载体,采用SDS-PAGE鉴定表达产物.采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径,以GM1-ELISA检测rLTB结合牛GM1的能力.建立幽门螺杆菌SS1株小鼠感染模型,分别以幽门螺杆菌(Hp)重组尿素酶B亚单位(rUreB)和黏附素(rHpaA)为抗原,分别检测rLTKA63和rLTB对rUreB和rHpaA的免疫保护增强作用.结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA和LTB基因条带.LTA基因定位突变后获得序列正确的LTKA63突变体.rLTKA63和rLTB表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%左右.LTKA63作用后TH1和TH2细胞较阴性对照组分别增加19.9%和42.3%,GM1-ELISA结果证实rLTB能与牛GM1结合.33.3%(4/12)rUreB和41.7%(5/12)rHpaA免疫小鼠胃黏膜标本中分离出幽门螺杆菌,且rUreB和rHpaA特异性S-IgA检测结果均为阴性.rUreB或rHpaA加用rLTKA63或rLTB免疫后,小鼠胃黏膜标本中幽门螺杆菌分离阳性率下降为16.7%～25.0%(P＞0.05),rUreB和rHpaA特异性S-IgA阳性率可达41.6%～58.3%(P＜0.01).结论成功地构建了LTKA63和LTB原核表达系统,所表达的rLTKA63和rLTB均具有较强的黏膜免疫佐剂活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡野	浙江金华职业技术学院医学院	6	32	4.0	5.0