抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达

• 作者: 张学光 杨明峰 王勤 瞿秋霞 葛彦 陈成 陈永井
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单克隆抗体 嵌合抗体 CD40
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 189-192
• 页数: 4页
• 分类号: Q254|R392.1
• 字数: 3492字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.02.017

摘要

目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAb VH和VL的DNA编码区基因.根据序列分析的结果, 设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.利用基因重组技术, 将mAb 5C11的VH、 VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、 Cκ链基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11.用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达.利用流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI基因数据库Blast的结果显示, 克隆的基因序列符合小鼠VH、 VL基因及其信号肽序列的特征.表达质粒pIRES/h5C11的构建正确, 并在293T细胞株中获得瞬时表达.表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb 5C11具有相同的抗原结合位点.结论: 成功地克隆了鼠抗人CD40 mAb V区编码基因, 并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达.