正交法用于真菌微卫星PCR体系优化

• 作者: 张宇 杨艳秋 横山耕治 王丽 王爽 贺丹 郭亮
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 真菌 微卫星重复 聚合酶链反应 正交法
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 1108-1111
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 4136字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2006.06.047

摘要

目的: 探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础.方法: 利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4 种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定 PCR 适宜的退火温度及循环次数.结果: 各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大.在PCR反应体系中(25 μL),Taq DNA 聚合酶 1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150 μmol·L-1,引物 0.25 μmol·L-1为最佳. 结论: 采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷.