检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立

• 作者: 姚新生 杨介钻 温茜 王小宁 邹红云 阮光平 马骊
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 连接介导PCR(LM-PCR) 胸腺 基因重排 重组信号序列(RSS)
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 342-345
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2932字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立检测人T细胞TCR BD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation-Mediated PCR,LM-PCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础.方法:在人TCRβ链BD1与BD2 5'端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD2 3'端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BW Linker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BW-linker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定.结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD2 5'和3'的RSS断裂末端,在2例T-ALLs的PBMC中检测到BD2 5'和3'的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LM-PCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合.结论:1例胸腺组织和2例T-ALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCR BD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LM-PCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究.