一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法

• 作者: 李钧敏 金则新
• 来源期刊: 应用生态学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 土壤总微生物 DNA 抽提 PCR扩增
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 页码范围: 2107-2111
• 页数: 5页
• 分类号: Q938
• 字数: 4672字
• 语种: 中文

摘要

以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl2和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9.22 μg·g-1,A260/A280为1.65,可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0.67 ng·μl-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.