His标记小鼠SRG-S基因的克隆和表达纯化

• 作者: 张建林 张悦红 张栋 解军 郭睿
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 原核表达 克隆,分子 遗传载体 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 464-467
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3938字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-6611.2006.05.006

摘要

目的构建His标记的小鼠精子发生相关基因SRG-S的原核表达载体并实现其表达及纯化. 方法提取小鼠睾丸组织总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 扩增目的基因片段,克隆入pGEM-T-easy载体,经测序正确后,定向亚克隆入pET-30a(+)表达载体,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,并利用抗His单克隆抗体进行Western blot检测. 结果 RT-PCR扩增得到大小约591 bp的目的基因片段,DNA序列分析结果与GenBank公布的序列一致,SDS-PAGE电泳显示经IPTG诱导有约32 kD的重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度达90%以上,且Western blot印迹表明该融合蛋白具有特异的抗His抗体特性. 结论采用基因克隆技术成功构建了带His标签的小鼠SRG-S原核表达载体,并获得了高纯度的重组蛋白,有利于后期抗体的制备,为进一步从蛋白质水平研究该基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	解军	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	142	537	11.0	15.0
2	张悦红	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	104	446	11.0	15.0
3	郭睿	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	37	117	7.0	8.0
4	张栋	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	39	148	7.0	10.0
5	张建林	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	20	86	5.0	8.0