mIL-10重组复制缺陷型腺病毒载体的构建及制备

• 作者: 冯宇锋 吴德沛 常伟荣 朱子玲 符粤文 陈峰
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 白介素-10 腺病毒
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 919-922
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2006.06.003

摘要

目的 构建小鼠白介素-10(mIL-10)重组腺病毒真核表达载体,为其体外表达及动物体内试验研究提供依据.方法 以pORF5-mIL-10质粒为模板通过PCR方法扩增回收mIL-10,将其定向连接到腺病毒载体pSGCMV中,构建pSGCMV-mIL10质粒.此质粒与5型腺病毒质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经同源重组产生重组复制缺陷型腺病毒Ad5-mIL-10.纯化后Ad5-mIL-10在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测定其滴度.结果 扩增所得mIL-10经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序均证实为小鼠白介素-10,重组腺病毒Ad5-mIL-10经PCR鉴定正确,滴度达2.5×1010pfu/ml.结论 成功构建了Ad5-mIL-10重组腺病毒载体系统,为研究IL-10在临床移植中的免疫学作用及基因治疗奠定基础.