人survivin蛋白的表达、纯化与单克隆抗体制备

• 作者: 周勇 张勇 李存孝 杨形涛 范清宇 马保安 高杰 黄立军
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 存活素 基因表达 抗体,单克隆
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2577-2579
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3144字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2006.22.002

摘要

目的:表达人survivin重组蛋白并制备单克隆抗体.方法:表达含有survivin基因的重组质粒pRSETB-survivin,表达人survivin重组蛋白,以此为抗原,常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS21细胞融合,得稳定分泌survivin mAb的杂交瘤细胞株,ELISA检测mAb的相对亲和力,Western blot检测mAb的特异性.间接免疫荧光观察骨肉瘤细胞中survivin的表达情况.结果:重组载体pRSETB-survivin转化入大肠杆菌BL21中表达所得蛋白经Western blot验证为目的蛋白.筛选出2株能稳定分泌特异性抗人survivin的mAb杂交瘤细胞株,免疫球蛋白亚类均为IgG类;单克隆抗体的亲和常数为S1 1.52×10-9mol/L,S2 2.31×10-9mol/L.Western blot结果显示,2株单抗识别相对分子质量为20 000的survivin单一条带,并发现在骨肉瘤细胞中survivin主要表达在胞浆内.结论:成功地表达出人survivin重组蛋白,制备出抗人survivin mAb,为进一步用于survivin的免疫学检测及骨肉瘤生物学治疗奠定了基础.