日本脑炎病毒(JEV)复制子表达载体的构建及其鉴定

• 作者: 俞永新 俞炜源 贾丽丽 邵炜 黄莺
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本脑炎病毒 复制子载体 外源蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: R5
• 字数: 5346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2007.01.006

摘要

在以往构建的JEV疫苗株SA14-14-2感染性克隆pBRkpn-JTF的基础上,构建了去除JEV结构区域基因(prM基因和E基因),保留非结构区域基因的复制子表达载体pCTCJEV、pCTMJEV,转染BHK-21细胞后,通过反转录PCR(RT-PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)检测该载体的自主复制能力和蛋白表达情况,结果证实该载体在BHK-21细胞中能够自主复制并且表达非结构蛋白.进一步在该载体中插入报告基因EGFP,检测外源蛋白的表达情况,结果显示在转染复制子载体的24h后,荧光显微镜下能够看见绿色荧光蛋白的表达,阳性信号持续增强,能够维持10d左右,证实了构建的复制子载体pCTCJEV能够有效地表达外源蛋白,这为进一步建立以乙脑病毒复制子为基础的疫苗载体系统打下基础.